HPLC

HPLCの基本原理

HPLC（High Performance Liquid Chromatography、 高速液体クロマトグラフィー）は、液体を移動相として使用し、化合物を分離、識別、定量するための分析技術です。その基本原理について以下に説明します。

1.　サンプル注入
• 分析対象の試料（サンプル）を溶媒に溶解し、HPLCシステムに注入します。

2.　移動相
• 移動相（モバイルフェーズ）は、試料をカラム（分離管）内に移動させる役割を持つ液体です。一般的には、水、メタノール、アセトニトリルなどの溶媒が使用されます。移動相はポンプによって高圧で送られます。

3.　カラム
• カラムはHPLCの心臓部であり、内部に充填された固定相（ステーショナリーフェーズ）によって試料成分を分離します。カラムの長さ、内径、充填物の種類によって分離の性能が異なります。最も一般的なカラムは、逆相カラム（C18）です。

4.　固定相
• 固定相はカラム内に詰められた材料で、試料の各成分と異なる相互作用を持ちます。逆相クロマトグラフィーでは、疎水性の固定相が使われ、疎水性の成分が固定相と強く相互作用します。

5.　分離
• 注入された試料は、移動相によってカラム内を移動します。試料の各成分は、固定相との相互作用により異なる速度でカラム内を移動し、これにより分離が行われます。固定相と強く相互作用する成分は遅く移動し、弱く相互作用する成分は速く移動します。

6.　検出
• カラムを通過した試料成分は、検出器で検出されます。一般的な検出器には、UV-Vis（紫外可視）検出器、蛍光検出器、質量分析検出器（MS）などがあります。各成分はカラムを通過する時間（保持時間）に基づいて識別されます。

7.　データ解析
• 検出器から得られた信号は、クロマトグラムというグラフとして表示されます。クロマトグラム上のピークの位置と面積に基づいて、試料の各成分の識別と定量が行われます。

ちなみに、逆相カラムの「逆相」という名称は、従来の正相クロマトグラフィーとは逆の条件で分離が行われることに由来しています。すなわち、逆相クロマトグラフィーは固定相に疎水性の物質を用いますが、正相クロマトグラフィーでは親水性の物質を使用します。